產(chǎn)品名稱：布魯氏菌（牛、豬、羊）核酸快速檢測(cè)試劑盒
英文名稱：Rapid Detection kit for Brucella spp

產(chǎn)品編號(hào)與包裝規(guī)格：

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：本試劑盒基于環(huán)介導(dǎo)的恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)（Loop-mediated isothermal amplification，LAMP），用于主要感染牛、豬、羊種布魯氏菌的快速檢測(cè)，可通過(guò)肉眼觀察反應(yīng)管中試劑顏色變化判讀結(jié)果。

檢測(cè)原理：利用兩對(duì)特殊引物和具有鏈置換活性的Bst DNA聚合酶，使模板兩端引物結(jié)合處循環(huán)出現(xiàn)環(huán)狀單鏈結(jié)構(gòu)，引物順利與模板結(jié)合并進(jìn)行鏈置換擴(kuò)增反應(yīng)，實(shí)現(xiàn)在恒溫條件下（60-65℃）進(jìn)行連續(xù)快速擴(kuò)增。反應(yīng)加入顯色指示劑，陰陽(yáng)性結(jié)果顯色差異顯著，可直接通過(guò)顏色變化判讀結(jié)果。

產(chǎn)品特點(diǎn)：
      1. 快速簡(jiǎn)便：將酶、引物等反應(yīng)組分混勻后進(jìn)行干粉化處理，增加試劑穩(wěn)定性，使用時(shí)減少溶液配制步驟，更為便捷，整個(gè)檢測(cè)反應(yīng)可在1 h內(nèi)完成；
      2. 特異性高：利用靶基因序列上的多個(gè)獨(dú)立區(qū)域設(shè)計(jì)多條引物，保證擴(kuò)增反應(yīng)的高度特異性；
      3. 靈敏度高：最-低檢驗(yàn)限達(dá)到10 CFU/Test；
      4. 判讀簡(jiǎn)單：反應(yīng)前加入顯色指示劑，反應(yīng)后通過(guò)肉眼觀察反應(yīng)液顏色變化或者經(jīng)熒光監(jiān)測(cè)儀器跟蹤熒光圖譜的變化判讀結(jié)果，直觀方便，且可有效避免反應(yīng)后開蓋造成的氣溶膠污染。

布魯氏菌核酸快速檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品組分：

注：顯色指示劑使用前請(qǐng)低速離心

儲(chǔ)存條件與保質(zhì)期：2~8℃條件下儲(chǔ)存，有效期為12個(gè)月。

適用儀器：
      1. PCR儀器或金屬浴恒溫器，如果檢測(cè)樣品為DNA樣品，水浴鍋即可。
      2. 高速離心機(jī)，樣品的前處理需要用高速離心機(jī)做分離。

樣品處理：

   1. 微生物樣品前處理：實(shí)驗(yàn)室中的布魯氏菌在合適的固體培養(yǎng)基中劃線培養(yǎng)，往200 μL PCR管中加入30 μL裂解液，挑取布魯氏菌菌至裂解液中充分懸浮，輕彈管壁消除氣泡，99℃加熱10 min進(jìn)行滅活和熱裂解處理。12000 r/min離心15 min，上清即為粗提的DNA，可轉(zhuǎn)移至200 μL PCR管中，在-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

   2. 在步驟1中培養(yǎng)的布魯氏菌可用細(xì)菌DNA-提取-試劑盒按照說(shuō)明書指導(dǎo)提取布魯氏菌DNA，-20℃保存?zhèn)溆谩?br/>      注：活性布魯氏菌，可感染人畜，具有高度傳染性，操作時(shí)需按照相應(yīng)生物安全等級(jí)操作規(guī)范進(jìn)行。

   3. 臨床樣本處理：用商品化試劑盒按照操作說(shuō)明書中從血清樣本中提取DNA，-20℃保存?zhèn)溆谩?br/>

恒溫?zé)晒夥ê怂峥焖贆z測(cè)試劑盒操作流程

布魯氏菌核酸快速檢測(cè)試劑盒使用指南：

1，陰、陽(yáng)性對(duì)照和干粉試劑復(fù)溶

   A. 陰、陽(yáng)性對(duì)照復(fù)溶：首-次使用時(shí)，加入80 μL超純水至陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照凍干粉中，待溶解后混勻，-20℃存儲(chǔ)待用 。
   B. 干粉試劑復(fù)溶：取出凍干粉試劑，按照需求剪取n個(gè)檢測(cè)試劑管（n=待檢測(cè)樣品數(shù)+1管陽(yáng)性對(duì)照+1管陰性對(duì)照），每管加入20 μL復(fù)溶液，完-全溶解后待用。

2，擴(kuò)增反應(yīng)
   A. 打開能夠提供恒溫條件的儀器，設(shè)置到64℃待用；
   B. 向上述已加入復(fù)溶液的n個(gè)反應(yīng)管中各加入顯色指示劑2.5 μL；
   C. 向上述已加入復(fù)溶液的n個(gè)反應(yīng)管中分別加入待測(cè)樣品DNA、陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照各2.5 μL，蓋緊蓋子；
   D. 將所有的反應(yīng)管置于恒溫儀器中，反應(yīng)55 min。

3，結(jié)果判讀：反應(yīng)結(jié)束后，建議在自然光線充足的環(huán)境條件下，將樣品置于白色背景下觀察結(jié)果，陰性對(duì)照檢測(cè)試劑管呈淡橙色，陽(yáng)性對(duì)照檢測(cè)試劑管呈熒光綠，待測(cè)樣品反應(yīng)管以此作為對(duì)照進(jìn)行判讀，若陰陽(yáng)對(duì)照反應(yīng)管任一結(jié)果與上述情況不符，則本次檢測(cè)結(jié)果無(wú)效，應(yīng)重新檢測(cè)或與產(chǎn)品技術(shù)支持聯(lián)系。

恒溫?zé)晒夥ê怂峥焖贆z測(cè)試劑盒靈敏度對(duì)比

布魯氏菌核酸快速檢測(cè)試劑盒(恒溫?zé)晒夥?用于感染牛和豬種布魯氏菌的快速檢測(cè)。

布魯氏菌核酸快速檢測(cè)試劑盒(恒溫?zé)晒夥?用于感染牛和豬種布魯氏菌的快速檢測(cè)。