国产成人免费视频精品一区|人妻少妇精品专区性色av免费|午夜性色一区二区三区免费视频|东京热中文字幕一区二区三区

銷售熱線

18164045677
主營(yíng)產(chǎn)品:不銹鋼過(guò)濾系統(tǒng),紅外線接種環(huán)滅菌器,浮游菌采樣器,脈沖震蕩樣品前處理器,數(shù)字化智能電熱鼓風(fēng)干燥箱,數(shù)字化智能電熱恒溫培養(yǎng)箱,實(shí)驗(yàn)室設(shè)備及環(huán)境溫濕度監(jiān)測(cè)系統(tǒng),潔凈工作臺(tái)等實(shí)驗(yàn)設(shè)儀器設(shè)備。
  • 技術(shù)文章ARTICLE

    您當(dāng)前的位置:首頁(yè) > 技術(shù)文章 > 支原體培養(yǎng)基簡(jiǎn)解

    支原體培養(yǎng)基簡(jiǎn)解

    發(fā)布時(shí)間: 2024-04-30  點(diǎn)擊次數(shù): 673次

     支原體檢查培養(yǎng)基基本知識(shí):
    支原體(Mycoplasma)是細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中常見(jiàn)的外源性污染物,開(kāi)展支原體污染檢測(cè)是細(xì)胞質(zhì)量控制微生物學(xué)安全性評(píng)價(jià)體系中的一項(xiàng)重要內(nèi)容。由于活細(xì)胞制劑終產(chǎn)品不能滅菌處理,被支原體污染后不像細(xì)菌或者真菌那樣容易被肉眼看見(jiàn),所以在其培養(yǎng)時(shí)也很難被觀察。因此需要適宜的支原體檢測(cè)方法。目前,《中華人民共和國(guó)藥典》規(guī)定的支原體檢測(cè)方法培養(yǎng)法和指示細(xì)胞培養(yǎng)法 (DNA染色法)是檢測(cè)支原體的“金標(biāo)準(zhǔn)",能夠檢測(cè)不同生長(zhǎng)特性的支原體,具有廣譜性 。

    環(huán)凱的精氨酸支原體肉湯培養(yǎng)基(貨號(hào):MP01B/MP01BP)和精氨酸支原體半流體培養(yǎng)基(貨號(hào):MP01S/MP01SP)可用于檢驗(yàn)利用精氨酸的支原體,如口腔支原體等,支原體肉湯培養(yǎng)基(貨號(hào):MP02B/MP02BP)和支原體半流體培養(yǎng)基(貨號(hào):MP02S/MP02SP)可用于檢驗(yàn)利用葡萄糖的支原體,如肺炎支原體等。

    支原體檢測(cè)培養(yǎng)基原理:

    精氨酸支原體肉湯培養(yǎng)基:利用口腔支原體分解利用精氨酸產(chǎn)堿使得原本含酚紅的橙色培養(yǎng)基變?yōu)榧t色。精氨酸支原體半流體培養(yǎng)基:直接培養(yǎng)口腔支原體于營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)充足的培養(yǎng)基中,觀察其生長(zhǎng)及菌落生成。支原體肉湯培養(yǎng)基:肺炎支原體通過(guò)葡萄糖代謝路徑利用葡萄糖產(chǎn)酸致使原本含酚紅的橙色培養(yǎng)基變?yōu)榈S色。支原體半流體培養(yǎng)基:直接培養(yǎng)肺炎支原體接種于營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)充足的培養(yǎng)基中,觀察其生長(zhǎng)及菌落生成。

    方法來(lái)源:

    《中國(guó)藥典》2020年版 3301 支原體檢查法

    image.png

    靈敏度檢查(變色單位試驗(yàn)法)

    器具:

    →試管:螺口旋蓋試管,利于培養(yǎng)時(shí)保持密閉;或者普通玻璃試管,滅菌時(shí)使用硅膠塞,培養(yǎng)時(shí)換成橡膠塞;或者培養(yǎng)時(shí)使用無(wú)菌液體石蠟液封。
    新生牛血清或者馬血清
    生物安全柜、生化培養(yǎng)箱等。
    培養(yǎng)基配制:
    基礎(chǔ)培養(yǎng)基:按標(biāo)簽所示配制方法制備,分裝8 mL/支,121℃滅菌15 min,待用。
    完quan培養(yǎng)基:臨用前每支8 mL基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入2 mL新生牛血清或馬血清。

    ※ 半流體培養(yǎng)基在使用前應(yīng)煮沸5~10 min,冷卻至55℃左右,然后加入新生牛血清或馬血清,充分搖勻。

    接種及培養(yǎng):選取變色的新鮮培養(yǎng)物,接種至待檢培養(yǎng)基中,做10倍系列稀釋,肺炎支原體稀釋至 10??~10??,接種在支原體肉湯/半流體培養(yǎng)基內(nèi);口腔支原體稀釋至 10?3~10??,接種在精氨酸支原體肉湯/半流體培養(yǎng)基內(nèi)。每個(gè)稀釋度接種3 支試管,置36±1℃密閉培養(yǎng)7?14天,觀察培養(yǎng)基變色結(jié)果。

    結(jié)果判定:以接種后培養(yǎng)基管數(shù)的 2/3 以上呈現(xiàn)變色的最高稀釋度為該培養(yǎng)基的靈敏度。

    陽(yáng)性案例展示 

       圖A:精氨酸支原體肉湯培養(yǎng)結(jié)果,左邊紅色為陽(yáng)性右邊橙色為陰性;

       圖B:精氨酸支原體半流體培養(yǎng)結(jié)果,左邊有菌落懸浮為陽(yáng)性,右邊試管為陰性;
       圖C:支原體肉湯培養(yǎng)結(jié)果,左邊黃色為陽(yáng)性,右邊橙色為陰性;

       圖D:支原體半流體培養(yǎng)結(jié)果,左邊有菌落懸浮為陽(yáng)性,右邊試管為陰性。

    image.png

    image.png

    注意事項(xiàng)

    靈敏度測(cè)定時(shí),支原體活化和傳代時(shí)建議做陰性對(duì)照,肉眼觀察到明顯的顏色變化時(shí),需盡快進(jìn)行傳代,過(guò)度培養(yǎng)會(huì)導(dǎo)致支原體的活性明顯衰減;

    半流體培養(yǎng)基煮沸融化時(shí)以全部溶解為宜,過(guò)度加熱易導(dǎo)致?tīng)I(yíng)養(yǎng)損失,接種時(shí)盡量在培養(yǎng)基未凝固,溫度約為37℃時(shí)接種支原體;

    支原體凍存可以使用10%甘油,凍干保護(hù)劑推薦選擇6%的蔗糖與1.5%的明膠。

      


產(chǎn)品中心 Products